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            公司新聞

            測序儀進(jìn)行pcr測序反應(yīng)的操作步驟

               測序儀進(jìn)行pcr測序反應(yīng)的操作步驟:
              (1) 取0.2ml的pcr管,用記號筆編號,將管插在顆粒冰中,按下表加試劑:
              所加試劑 測定模板管 標(biāo)準(zhǔn)對照管
              bigdye mix 1μl 1μl
              待測的質(zhì)粒dna 1μl -
              pgem-3zf (+) 雙鏈dna - 1μl
              待測dna的正向引物 1μl -
              m13(-21)引物 - 1μl
              **去離子水 2μl 2μl
              總反應(yīng)體積5μl,不加輕礦物油或石蠟油,蓋緊pcr管,用手指彈管混勻,稍離心。
              (2) 將pcr管置于9600或2400型pcr儀上進(jìn)行擴(kuò)增。98℃變性2min后進(jìn)行pcr循環(huán),pcr循環(huán)參數(shù)為96℃ 10s,50℃ 5s,60℃4min,25個(gè)循環(huán),擴(kuò)增結(jié)束后設(shè)置4℃保溫。
              (3) 醋酸鈉/乙醇法純化pcr產(chǎn)物
              (4) 電泳前測序pcr產(chǎn)物的處理
              (5) 分析或打印出彩色測序圖譜
              (6) 序列分析:儀器將自動進(jìn)行序列分析,并可根據(jù)用戶要求進(jìn)行序列比較。如測序序列已知,可通過序列比較以星號標(biāo)出差異堿基處,提高工作效率



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